
蛋⽩質組(Proteome)⼀詞(ci)源於蛋⽩質(protein)與基因組(zu)(genome)兩(liang)個詞的組合,意指(zhi)“⼀種(zhong)基因組所表達的全套(tao)蛋⽩質”,即包括⼀種細胞乃⾄⼀種⽣物所表達的全(quan)部蛋⽩質。蛋⽩質組(zu)與轉錄組有許多相(xiang)似之處,也具有時空特(te)异性,會随(sui)着環境、組織(zhi)或個體的改變⽽改變。

IP(免疫沉淀):是利⽤抗原抗體特异性反應純化(hua)富集⽬的蛋⽩的⼀種⽅法。
免疫共(gong)沉淀技術(co-IP)作為蛋白質(zhi)相互作用(yong)研究的重要方法,可對兩(liang)種已知蛋白是否存在相互作用進(jin)行驗證,同時也可(ke)以驗證在总蛋白(bai)中是否含有與已知蛋白相互作用的未知蛋白,从而在(zai)蛋白組學研
Pulldown:带標簽的誘饵蛋⽩能被特异結合该標簽的固相親和配基捕(bu)获,形成(cheng)“次級親和⽀持物”,⽤於純(chun)化與誘饵蛋⽩相互作(zuo)⽤的其他蛋⽩。可⽤來證(zheng)明兩種已知(zhi)蛋⽩間存在的相互作⽤或尋找與已知蛋⽩直接(jie)发⽣相互作(zuo)⽤的未知分(fen)⼦。

蛋⽩質組學本質上指(zhi)的是(shi)在⼤規模⽔平上研究蛋⽩質的特(te)征(zheng),包括蛋⽩質的表達⽔平,亚細胞定位,翻译后的修(xiu)飾,蛋⽩與蛋⽩相互作(zuo)⽤等,由此获得蛋⽩質⽔平上的(de)關於疾病发⽣、細胞代谢(xie)、⽣⻓发育以及各(ge)種胁迫(po)反應等過程的整體⽽全⾯的認识。

Western Blot技術(shu)作為蛋白質檢測的(de)經典方法,其核心原理是利用聚丙烯酰胺凝(ning)胶電泳對蛋白(bai)質樣品進行分离。在(zai)该技術框架中(zhong),待檢測的物質是蛋白(bai)質,而(er)抗體則(ze)扮演"探针"的角色,標記的二抗负責提供(gong)"顯色"信號。首先,通過(guo)SDS-PAGE電泳可(ke)將蛋白質樣品按(an)相對分子質量進行分离,随后將分离后的蛋白質(zhi)轉移至固相载體上,常用的固相载體包括硝酸(suan)纖維素薄膜(NC)。这(zhe)類载體具有優异的蛋白質吸附能力,不仅能够有效固定蛋(dan)白質,還能保持電泳分(fen)离后多肽的原始類型及其生物學活性不(bu)发生改變,轉(zhuan)移完(wan)成后的NC膜便被称為(wei)一個印迹(blot)。在進行抗原抗體反應(ying)前,需要用蛋白溶液(如5%BSA)處理NC膜,以(yi)封闭膜上(shang)的疏水結合位點,防止非特异性吸附。随后加入目標蛋白的一(yi)抗(kang)進行處理,一抗將與NC膜(mo)上的目標蛋白特异結合形成抗原抗體复合物(wu),清洗步骤除去未結(jie)合的一抗后,目標蛋白位置上仅保留結合(he)的一抗。最后,將經一抗處理過的NC膜再(zai)用標記的二抗(kang)(即针對一抗的抗體)進行處理,攜带標記的二抗與一抗(kang)結合形成新的抗體复(fu)合物,这些標記(ji)物可以精確指示一抗(kang)的位置,从而確定待研(yan)究蛋(dan)白質的具體位置。